Ajuste de técnicas moleculares basadas en RT-PCR para la detección de virus en plantas de frutilla

Abstract

La frutilla (Fragaria × ananassa Duch.), una de las frutas finas más consumidas a nivel mundial, posee una gran relevancia socioeconómica en los países productores. Las enfermedades virales afectan significativamente el rendimiento y la calidad de los cultivos de frutilla. En Argentina, los virus predominantes que afectan este cultivo son: Strawberry Crinkle Virus (SCV), Strawberry Mild Yellow Edge Virus (SMYEV), Strawberry Mottle Virus (SMoV), y Strawberry Polerovirus 1 (SPV1). Tucumán, una provincia clave en la producción de frutilla en Argentina, presenta una alta incidencia de enfermedades virales. Por lo tanto, es esencial implementar métodos de diagnóstico altamente sensibles para un monitoreo fitosanitario eficaz y un manejo adecuado del cultivo. En el presente trabajo se ajustaron técnicas de biología molecular para la detección de los cuatro virus reportados en el cultivo de frutilla en Argentina. Se detalla un método confiable para obtener ARN mensajero de alta calidad a partir de hojas de frutilla. Además, se diseñaron cebadores específicos nuevos y se optimizaron las condiciones de RT-PCR para la detección de SCV, SMYEV, SMoV y SPV1. Mientras que SPV1 fue detectado únicamente en el control positivo (enviado por IPAVE), SCV, SMYEV y SMoV fueron identificados en plantas de un lote comercial. Ninguno de los virus fue detectado en plantas provenientes de cultivo in vitro de tejidos de frutilla. El protocolo propuesto contribuye al desarrollo de herramientas para el monitoreo de la sanidad de plantas frutilla.

Strawberry (Fragaria × ananassa Duch.), a globally consumed berry, holds major socio-economic significance in producing countries. Viral diseases significantly impact strawberry yield and quality. In Argentina, the predominant viruses affecting strawberry crops are: Strawberry Crinkle Virus (SCV), Strawberry Mild Yellow Edge Virus (SMYEV), Strawberry Mottle Virus (SMoV), and Strawberry Polerovirus 1 (SPV1). Tucumán, a key strawberry-producing province in Argentina, faces high viral disease incidence. Implementing highly sensitive diagnostic methods is therefore essential for effective phytosanitary monitoring and crop management. This study adapted molecular techniques for the concurrent detection of these four viruses in Argentina strawberries. We detail a reliable method for high-quality mRNA from strawberry leaves. Furthermore, novel specific primers were designed and RT-PCR conditions optimized for SCV, SMYEV, SMoV, and SPV1 detection. While SPV1 was detected solely in the positive control (submitted by IPAVE), SCV, SMYEV, and SMoV were identified in plants from a commercial field. None of the viruses were detected in plants from in vitro strawberry tissue culture. The established protocol provides a valuable tool for enhancing strawberry plant health surveillance programs.