Identificación de metabolitos bioactivos aislados de plantas medicinales autóctonas del norte argentino. Detección de blancos de acción biológica

Abstract

De acuerdo con los objetivos de aislar, purificar y elucidar estructuralmente metabolitos bioactivos sintetizados por plantas autóctonas del norte argentino empleadas en medicina tradicional, y de validar científicamente sus usos como tratamiento de afecciones de piel, se investigaron las actividades antibacteriana, antioxidante y antiinflamatoria, y la toxicidad de infusiones, decocciones y tinturas de hojas de Caesalpinia gilliesii (Wallich ex Hooker) D. Dietrich (Fabaceae), Melia azedarach Linneo (Meliaceae), Plantago lanceolata Linneo (Plantaginaceae) y Lepidium didymum Linneo (Cruciferae). La actividad antibacteriana fue determinada por bioautografía y microdilución en medio líquido. La actividad antioxidante, por ensayos de depuración de DPPH e inhibición de lipoperoxidación empleando membranas de glóbulos rojos humanos como fuente de ácidos grasos poliinsaturados. También se determinó a nivel intracelular, utilizando la sonda H2DCFDA (diacetato de 2',7'-diclorodihidrofluoresceina) fluorescente, sensible a la oxidación. La actividad antiinflamatoria se evaluó mediante ensayos de inhibición sobre enzimas claves en procesos inflamatorios: hialuronidasa y colagenasa. La toxicidad se investigó a través del ensayo de letalidad sobre Artemia salina (in vivo), y citotoxicidad sobre linfocitos (in vitro). Los resultados obtenidos se compararon con los correspondientes a sustancias estándares de actividad reconocida, permitiendo evaluar la eficacia de los extractos. Se seleccionaron aquellos con bioactividades más relevantes y ausencia de toxicidad, para el aislamiento de las moléculas responsables de las actividades biológicas evidenciadas. Los compuestos bioactivos de las fracciones hexánica y metanólica de la infusión de C. gilliesii y de la fracción en acetato de etilo de la tintura de M. azedarach fueron purificados por cromatografía en columna de Sephadex-LH20 y cromatografía líquida de alta performance en fase reversa (HPLC-FR) con columnas analítica y semipreparativa; y aislados e identificados por cromatografía gaseosa-espectrometría de masas (CG-EM(IE)) y HPLC/FR(DAD)-EM(ESI). Las sustancias antioxidantes aisladas a partir de la fracción metanólica de C. gilliesii fueron identificados por Resonancia Magnética Nuclear de protón (RMN-1H). Las actividades de las fracciones bioactivas y los compuestos puros fueron analizadas sobre blancos de acción biológica. La acción antibacteriana de los compuestos en la estructura celular de Staphylococcus sp se observó por microscopía electrónica. Se analizó la actividad inhibitoria de peroxidación de lípidos de los compuestos puros, como así también la inhibición de la enzima colagenasa. La infusión de C. gilliesii presentó actividad antibacteriana principalmente sobre Enterococcus faecali resistente a Ampicilina y Vancomicina, y Staphylococcus sp. meticilino resistente (CIM: 500 μg/mL). Los compuestos bioactivos de dicho extracto se purificaron por técnicas cromatográficas y se identificaron a través de análisis espectrométricos, encontrándose escopolina (escopoletin-7-glucosido), y los flavonoides isoquercitrina (quercetin-3-glucósido) y rutina (quercetin-3-rutinosido), con actividad antioxidante. Este estudio demostró que la infusión de C. gilliesii no presentó toxicidad y es una fuente natural de compuestos antioxidantes y antibacterianos. La tintura de M. azedarach presentó actividad antibacteriana (CIM: 500 μg/mL) sobre cepas relevantes en lesiones de piel. Los compuestos bioactivos aislados a partir de la fracción en acetato de etilo, proveniente de la tintura de M. azedarach revelaron la presencia de estructuras esteroidales, al ser analizados por técnicas cromatográficas acopladas a espectrometría de masas. Este es el primer estudio fitoquímico-biológico basado en datos etnomedicinales acerca de la presencia metabolitos bioactivos en extractos de hojas de C. gilliesii y M. azedarach. Los hallazgos encontrados posibilitan la validación del uso tradicional de estas especies para el tratamiento de afecciones cutáneas, y revelan a las mismas como fuentes naturales de fitocomplejos y/o sustancias bioactivas con posible aplicación terapéutica.